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可見分光光度計的工作原理

發布時間: 2025-06-11  點擊次數: 155次

一、基本原理:光的吸收與朗伯 - 比爾定律

光吸收的本質

當可見光(波長范圍約 400-760nm)通過被測物質的溶液時,溶液中的分子或離子會選擇性吸收特定波長的光,導致光的強度減弱。物質對光的吸收程度與物質的濃度、液層厚度等因素相關。

二、儀器結構與工作流程

1. 核心組件及功能

組件功能描述

光源發射連續可見光,常用鎢燈(覆蓋 320-2500nm,適用于可見光譜段)。

單色器將復合光分解為單色光,通過棱鏡或光柵實現波長選擇,確保入射光為單一波長。

比色皿盛放被測溶液,材質為玻璃(適用于可見光),液層厚度通常為 1cm。

檢測器如光電管或光電倍增管,將光信號轉換為電信號,測量透射光強度。

信號處理與顯示系統放大電信號并轉換為吸光度或濃度值,通過顯示屏輸出結果。

三、定量分析步驟與應用邏輯

樣品預處理

將被測物質溶解或反應生成能吸收可見光的化合物(如顯色反應),確保溶液均勻透明。

波長選擇

選擇被測物質的最大吸收波長(λmax)作為測量波長,此時靈敏度最高,誤差最小。例如,測定鐵離子時,常通過顯色反應生成紅色絡合物,選擇 510nm 波長測量。

標準曲線繪制

配制一系列已知濃度的標準溶液,測量其吸光度,以濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線,確定線性關系。

樣品測量與計算

測量樣品溶液的吸光度,通過標準曲線或朗伯 - 比爾定律計算樣品濃度。

四、關鍵影響因素與注意事項

溶液狀態

溶液需均勻無渾濁,否則顆粒會散射光,導致吸光度測量偏差。

波長準確性

單色器波長校準需精準,若波長偏移,會導致摩爾吸光系數變化,影響濃度計算精度。

比色皿誤差

比色皿材質、厚度一致性及清潔度需嚴格控制,不同比色皿間的透光率差異會引入誤差。

環境與儀器穩定性

光源強度波動、檢測器靈敏度變化或溫度波動,均可能影響測量重復性。

五、應用場景與行業實例

化學分析:水質中重金屬(如銅、鐵)含量測定、食品中添加劑(如亞硝酸鹽)檢測。

生物醫藥:蛋白質濃度測定(Bradford 法、Lowry 法)、藥物含量分析。

環境監測:廢水 COD(化學需氧量)、氨氮濃度的快速檢測。

工業生產:化工原料純度分析、染料濃度控制等。


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